Studio comparativo in vitro dei meccanismi di sopravvivenza di M.bovis e M.avium subsp. paratuberculosis. Valutazione precoce, ai fini diagnostici, dei profili di espressione proteica di macrofagi infettati sperimentalmente

La tubercolosi bovina e la paratubercolosi sono due patologie che costituiscono un importante minaccia per la salute umana ed animale. Il presente lavoro si basa sullo studio dei prodotti proteici e dei profili di espressione genica di macrofagi di specie bovina e caprina infettati con ceppi di M.bovis e M.paratuberculosis a differenti concentrazioni. Lo scopo è quello di individuare potenziali biomarkers da utilizzare a scopo diagnostico e chiarire le fasi patogenetiche precoci relative all’interazione macrofago-micobatterio. A tal proposito sono stati standardizzati due protocolli di prelievo e messa a punto della coltura macrofagica successivamente infettata con ceppi di campo (singolarmente o in forma mista) di M.bovis and M.paratuberculosis a differenti molteplicità di infezione stabilite secondo diluizioni scalari. Il surnatante ed il pacchetto cellulare venivano prelevati a distanza di 24 h, 48 h ed 1 settimana e sottoposti al saggio ELISA ed alla RT-PCR. I risultati ottenuti hanno evidenziato un aumento dell’IL-6 nei macrofagi bovini infettati con M.bovis e sono stato confermati da ulteriori analisi condotte su campioni di siero di animali naturalmente infetti. Inoltre è stata osservata un’azione modulante della risposta infiammatoria in caso di compresenza di entrambi i patogeni ed un’inibizione del trascritto del TNFα come meccanismo di sopravvivenza dei micobatteri nella specie bovina. E’ stata inoltre riscontrata un’inibizione nella produzione dell’IL-10 nella specie bovina che viceversa non si evidenziava nell’infezione paratubercolare della specie caprina. Quest’ultima non ha rivelato alcuna produzione citochinica in risposta ad entrambi i micobatteri tuttavia risultava evidente l’aumento dell’espressione genica per l’IFN-γ. In aggiunta è stata registrata la produzione di IL-2 in entrambe le specie. In conclusione è stata identificata una profonda variabilità della risposta macrofagica ad entrambe le infezioni (nella loro forma singola o mista) legata alla specie animale, alla concentrazione dei micobatteri ed, infine, nel caso di M.bovis, a ceppi differenti.