Estrazione, isolamento, espansione e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali prelevate da annessi fetali equini

Le cellule staminali mesenchimali sono studiate da molti autori per la capacità di differenziarsi in cellule della linea mesenchimale (adipociti, condrociti e osteociti) e per le loro proprietà immunogeniche che le rendono idonee per essere impiegate nella medicina rigenerativa. Proprio per l’importanza dell’utilizzo di queste cellule a fini terapeutici, lo scopo del lavoro è stato quello di definire un protocollo di estrazione, isolamento, espansione e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da annessi fetali equini ed in particolare da cordone ombelicale (gelatina di Wharton) e da amnios, evidenziando al contempo la loro localizzazione nei tessuti da cui sono state estratte. A tale scopo abbiamo prelevato campioni di cordone ombelicale ed amnios dai quali sono state estratte cellule mononucleate ed isolate cellule staminali mesenchimali che sono state fatte crescere su terreni diversi quali MSCBM, αMEM ed αMEM+EGF. I risultati ottenuti hanno evidenziato una cinetica di crescita simile per le cellule coltivate in MSCBM e per quelle coltivate in αMEM, mentre l’utilizzo di EGF ha portato ad un incremento notevole del numero di cellule ottenute ed un numero di passaggi più elevato fino alla senescenza. L’analisi citofluorimetrica delle MSCs isolate da amnios ha evidenziato la presenza di antigeni di superficie quali CD44, CD90, CD45 e CD14, mentre l’analisi immunoistochimica su campioni di tessuto di cordone ombelicale e di amnios è risultata positiva al CD117, CD105 ed Oct-4. Queste cellule, fatte moltiplicare in mezzi di coltura idonei, si sono differenziate nella linea condrogenica, osteogenica ed adipogenica confermando la loro natura di cellule staminali mesenchimali. Le cellule da noi studiate hanno dimostrato caratteristiche di forte staminalità ed una buona resa nell’espansione per cui possono ritenersi ottime candidate ad essere usate nella medicina rigenerativa, con particolare riferimento alle patologie osteoarticolari del cavallo sportivo.