STUDIO DEL PROCESSO DI MATURAZIONE ED ATTIVAZIONE DI FOSFOLIPASI A2 FUNGINE

TbSP1 (Tuber borchii secreted protein 1) ਠuna fosfolipasi che si accumula nello strato interno della parete cellulare e nello spazio extracellulare in miceli, corpi fruttiferi e micorrize del fungo simbiotico T. borchii. Un'analisi dei livelli di mRNA di TbSP1 in funghi cresciuti in vivo in differenti condizioni nutrizionali ha evidenziato una regolazione in risposta alla disponibilità  di nutrienti. In particolare, terreni carenti di carbonio o di azoto, inducono un significativo aumento nell'espressione di TbSP1. E' stato precedentemente dimostrato che la proteina ਠin grado di attivarsi mediante auto rimozione della porzione N-terminale sia in vitro che in vivo. Il meccanismo del processo di digestione di TbSP1 ਠdi tipo intermolecolare ed endoproteasico. Il sito proteasico ਠlocalizzato sul frammento di 14.5 kDa ed ਠdistinto dal sito fosfolipasico. Nel presente lavoro di tesi viene descritta la caratterizzazione biochimica di TbSP1 con la determinazione dei parametri cinetici della reazione fosfolipasica cosଠcome delle costanti di affinità  per il calcio di TbSP1. E' stata inoltre analizzata l'importanza della presenza dello ione calcio in relazione alle due attività  di TbSP1 e sono stati condotti esperimenti al fine di identificare i residui responsabili dell'attività  proteasica. Inoltre, TbSP1 viene confrontata con altre fosfolipasi A2 fungine. In particolare ਠstata indagata la possibilità  che due proteine da T. melanosporum e N. crassa, omologhe a TbSP1, abbiano lo stesso meccanismo di maturazione ed attivazione. Infine, viene analizzata l'attività  fosfolipasica e l'eventuale capacità  di digestione in trans di una forma stabile di TbSP1 da parte di alcune tra le principali PLA2 descritte in letteratura.