Studio degli aspetti bio-molecolari responsabili della differenziazione di UCB-SC verso cellule insulino secernenti in diverse condizioni sperimentali

La ricerca sulle cellule staminali e' concentrata sull'obiettivo di riuscire a controllarne il differenziamento con lo scopo di ottenere cellule differenziate in uno qualsiasi dei tessuti di volta in volta necessario per fini terapeutici. Queste cellule forniscono importanti informazioni sui meccanismi di controllo genetico ed epigenetico dello sviluppo, e possono rendere attuali e reali trattamenti terapeutici per gravi malattie genetiche e per malattie degenerative. Lo scopo del progetto di ricerca e' stato quello di individuare un protocollo sperimentale che, utilizzando cellule staminali di facile reperibilita' quali quelle prelevate dal cordone ombelicale UCB-SC (Umbilical Cord Blood Stem Cell), poste in coltura con fattori di crescita essenziali, favorisca lo sviluppo delle cellule beta pancreatiche. Ottenere cellule beta pancreatiche risulta essere una tappa di fondamentale importanza per le future terapie del Diabete. Nel nostro studio abbiamo valutato gli aspetti bio-molecolari responsabili della differenziazione verso cellule insulino secernenti in diverse condizioni sperimentali. Il protocollo da noi messo a punto precedentemente e' stato modificato al fine di individuare il "microambiente" ideale per la loro differenziazione. Sono state avviate colture cellulari di :UCB-SC senza Fattori di Crescita, UCB-SC con Fattori di Crescita, UCB-SC con Fattori di Crescita + Acido Retinoico, UCB-SC con Fattori di Crescita + DMSO, UCB-SC con Fattori di Crescita + ECM (matrice extracellulare); UCB-SC con Fattori di Crescita + cellule del Sertoli microincapsulate in sferule di alginato. Per ogni condizione sperimentale sono state applicate le seguenti procedure: Visualizzazione al microscopio- Conta cellulare con trypan blue - Valutazione citofluorimetrica- Valutazione di espressione di geni coinvolti nel processo embriogenetico delle cellule pancreatiche: Selezione primer -Estrazione di RNA- RT- PCR- Elettroforesi su gel di Agarosio- Real Time RT-PCR- Immunostaining C Peptide Test per la valutazione della funzionalita'. Nonostante le difficolta' riscontrate nella standardizzazione di questo protocollo i risultati ad oggi ottenuti, che ci riproponiamo di confermare, in particolare i dati riferiti alle co-colture di UCB-SC e microcapsule di cellule del Sertoli, evidenziano come l'utilizzo delle cellule staminali prelevate dal sangue del cordone ombelicale rappresentino una fonte certa per le future terapie farmacologiche del diabete e non solo.