Purificazione di plasminogeno con membrane di affinita'

Alcune patologie dell'occhio come la retinopatia diabetica, il pucker maculare, il distacco della retina possono essere curate con un intervento di vitrectomia. I rischi associati all'intervento potrebbero essere superati ricorrendo alla vitrectomia enzimatica con plasmina in associazione o in sostituzione della vitrectomia convenzionale. Inoltre, l'uso di plasmina autologa eviterebbe problemi di rigetto. La plasmina si ottiene attivando il plasminogeno con enzimi quali l'attivatore tissutale (tPA) e l'urochinasi ( uPA ) . La purificazione del plasminogeno dal sangue avviene normalmente attraverso cromatografia di affinità  con resina. Tuttavia, le membrane di affinità  costituiscono un supporto ideale per questa applicazione poichà© possono essere facilmente impaccate prima dell'intervento, permettendo la realizzazione di un dispositivo monouso che fornisce un processo rapido ed economico. Obiettivo di questo lavoro ਠla preparazione di membrane di affinità  per la purificazione del plasminogeno utilizzando L-lisina come ligando di affinità . Per questo scopo sono state usate membrane in cellulosa rigenerata ad attivazione epossidica, modificate con due diversi protocolli per l'immobilizzazione di L-lisina. La densità  ligando ਠstata misurata mediante un saggio colorimetrico che usa l'acido arancio 7 come indicatore. La resa di immobilizzazione ਠstata studiata in funzione del tempo di reazione e della concentrazione di L-lisina. Le membrane ottimizzate sono state caratterizzate con esperimenti dinamici usando siero bovino e umano, i risultati sono stati confrontati con quelli ottenuti in esperimenti paralleli condotti con una resina commerciale di affinità  con L-lisina. Durante gli esperimenti con siero, le frazioni provenienti da ogni fase cromatografica sono state raccolte e analizzate con HPLC ed elettroforesi SDS-PAGE. In particolare, l'elettroforesi dei campioni eluiti presenta una banda del plasminogeno ben definita indicando che le membrane di affinità  con L-lisina sono adatte alla purificazione del plasminogeno. Inoltre, ਠemerso che le membrane hanno maggiore produttività  della resina commerciale di riferimento.