Messa a punto di un nuovo metodo biomolecolare per la misura dell’attività gamma-secretasica in cellule viventi

La gamma secretasi media la proteolisi in un sito intramembrana della proteina precursore dell'amiloide (APP), di Notch e di altri substrati cellulari, ed è considerata un target farmacologico primario nella ricerca per la terapia della malattia di Alzheimer e recentemente per il cancro. In questo lavoro è descritto un nuovo, semplice e rapido test per misurare l'attività di questo enzima in cellule viventi usando delle sonde fluorescenti membranose, APP-GFP, C99-GFP e NotchDeGFP, come substrati della gamma secretasi. Abbiamo convalidato il test applicando degli inibitori dell'enzima noti (DAPT and L-685,458), mostrando che le nostre sonde posizionali funzionano bene espresse in diverse linee cellulari. Inoltre, coesprimendo diverse forme doi presenilina (il centro catalitico della secretasi) è stato valutato il ruolo delle varianti di presenilina nella modulazione dell'enzima.