Genetic Diversity of Sudanese Leishmania Parasites and Possible Correlation to Clinical Signs

Introduzione: Negli ultimi anni Leishmaniosi si imposta all'attenzione medica come un problema sempre più rilevante. Le malattie sono associate con la povertà nei paesi in via di sviluppo e considerate importati o riemergenti in Europa. Leishmaniosi è un gruppo di malattie globalmente diffusa causata da un patogeno intracellulare del sistema immunitario targeting i macrofagi e le cellule dendritiche. Nell'uomo l'infezione si trasmette attraverso le punture dei flebotomi. I sintomi variano dalle lesioni cutanea e muco-cutanea che possono causare vasta distruzione delle membrane mucose alle malattie mortale viscerale che colpisce gli organi haemopoetici. leishmaniosi è endemica nelle regioni tropicali e subtropicali di 88 paesi, sedici sono paesi sviluppati, 72 sono in via di sviluppo, 13 di loro sono tra i meno sviluppati. Il Sudan è conosciuto fra i più grandi focolai a livello mondiale dove Leishmaniosi rappresenta un grave problema di salute causando elevato numero di vittime. Leishmania donovani complex e Leishmania major sono noti per essere gli agenti eziologici, tuttavia, i parassiti della Leishmania donovani comlex che causano diverse forme cliniche, i.e viscerale (VL), cutanee (CL), muco-cutanea (ML) e post kala-azar Leishmaniosi (PKDL) sono considerati geneticamente un gruppo omogeneo. Obiettivi: Per comprendere la correlazione tra la diversità genetica e le manifestazioni cliniche. Obiettivi specifici: 1) geneticamente caratterizzare isolati da pazienti Sudanesi diagnosati di diversi tipi di leishmaniosi per capire la correlazione tra diverse manifestazioni cliniche e il profilo genetico di Leishmania.2) Indagare sulla presenza o assenza di infezioni miste e / o ibridi. 3) Per costruire un quadro attendibile delle varie suddivisioni filogenetici in relazione alla virulenza, utilizzando i gene Internal Transcribed Spacer (ITS) Lyshmanolysin (GP63) e il citocromo ossidasi II Materiali e metodi: è stato utilizzato un’approccio basato sul genoma comparativo per analizzare i tre geni, citocromo ossidasi II (COII), Internal Transcribed Spacer (ITS) e il GP63 (sia gp63 3/4 che il MSPC). Sono stati utilizzati 111 campioni provenienti da 72 pazienti sudanese sospettati di diversi Leishmaniosi.In primo luogo, un real time PCR è stato sviluppato per raccogliere campioni positivi. In secondo luogo, per rilevare il polimorfismo interspecifico al livello di specie, citocromo ossidasi II (COII) gene è stato amplficato per tutti i campioni positivi nel real time PCR. Il metodo comprende l'uso di sequenziamento diretto e tecniche di clonazione. In terzo ed ultimo luogo, per rilevare il polimorfismo intraspecifico al livello del ceppo e dei sotto tipi di alcuni isolati positivi, (ITS) e il GP63 (entrambi gp63 3/4 e MSPC) geni sono stati amplificati. Il metodo comprende l'uso di tecniche di clonazione Risultati e Discussione: 40 pazienti su 72 (55,6%) e 58 campioni su 111 (52,3%) sono state confermate dal Real Time PCR come Leishmania positivi. Cinque campioni cutanei provenienti da cinque pazienti sono stati esaminati, tre di loro sono stati infettati in concomitanza sia con L.donovani che con L.major come è confermato dal clonaggio del COII e ITS geni. L’ analisi dei dati ITS delle colonie correlate a L. major nel tre campioni cutanee ha rivelato la presenza di più di un ceppo / ibrido di L.major come è stato dimostrato dai siti polimorfici rilevati all'interno dei pazienti e tra di loro. Gli altri due campioni cutanei sono stati causati soltanto da L.donovani, ma differenti tipi di sequenza sono stati rilevati dal ITS gene. Un paziente possedeva sequenza simile di L. infantum COII, il GP63 analisi di sequenza dallo stesso paziente ha confermato alcune colonie come L. infantum, mentre, due dei sei siti polimorfici individuati nel ITS gene erano simili a quelli caratteristici per L.infantum diversi zymodemi. Il numero di campioni PKDL e ML non era sufficiente per trarre una conclusione. Tuttavia, COII e ITS dati hanno indicato L.donovani come l’agente causale, ITS dati ha mostrato notevoli tipi di diversi sequenze tra le colonie dei due campioni. Gli stessi risultati sono stati trovati per quanto riguarda altri campioni attribuiti al VL. Gp63 analisi dei dati di sequenza di alcune colonie attribuite ai campioni VL (ossia 10 HBM, 3HBM e 11HBM) ha individuato due gruppi genetici all'interno della L. donovani complex, ma diversi da L. infantum e L. donovani. Conclusioni: Lo studio conclude che 1) ha affermato la presenza di infezione mista con L. donovani e L. major da un unico aspirato cutaneo. a nostra conoscenza questo è il primo rapporto di L. donovani e L. maggiore mista-infezione in Sudan. In aggiunta altri casi di tale infezione mista dallo stesso campione cutanea non sono stati riportati altrove. 2) lo studio ha valutato la circolazione di più di un ceppo / ibrido di L. major e L. donovani tra pazienti sudanesi. 3) la presenza di L. infantum come agente eziologico di VL in Sudan è stato affermato da CO II e ITS geni. 4) Leishmania isolati con le specie o ceppi misti potrebbero essere sottoposti a pressione selettiva durante la cultura, l’estrazione diretta da materiali biologici è importante per la caratterizzazione. Questi risultati hanno implicazioni importanti per quanto riguarda la diagnosi, la scelta della terapia più appropriata e la possibilità di sviluppare resistenza ai farmaci e allo stesso tempo, porre le basi per futuri studi come la prevalenza delle diverse specie e vettori e la competenza del Phlebotomus spp. nel trasmettere diversi Leishmania.