Validazione del saggio OncoPredict HPV DNA® sui campioni di auto-prelievo vaginali ed urinari: risultati dello studio EUROPEAN-VALHUDES

Il test HPV su campioni di auto-prelievo vaginale e di urina rappresenta una promettente strategia per migliorare la copertura dello screening del carcinoma della cervice uterina. L’obiettivo di questo studio è determinare se il kit OncoPredict HPV DNA®, un nuovo dispositivo diagnostico in vitro basato su PCR a doppia fase che comprende due serie di test (Screening, SCR, e Quantitative Typing, QT), eseguito sui campioni di auto-prelievo vaginale e sulle urine del primo mitto, raccolti rispettivamente tramite FLOQSwab® e Colli-Pee®, abbia un’accuratezza diagnostica paragonabile rispetto a quando eseguito sui campioni cervicali raccolti con Cervex-Brush®, secondo il protocollo VALHUDES (VALidation of HUman papillomavirus assays and collection DEvices for HPV testing on Self-samples and urine samples). L’obiettivo secondario dello studio è valutare la concordanza analitica della genotipizzazione tra i campioni auto-prelevati ed il campione cervicale e la carica virale normalizzata degli HR-HPV. In totale 600 donne di età compresa tra 25 e 65 anni sono state arruolate in 4 centri internazionali partecipanti (Istituto Europeo di Oncologia di Milano, Spedali Civili di Brescia, Consultori Familiari ASSL di Sassari e Simpson Centre for Reproductive Health - Royal Infirmary di Edimburgo). La sensibilità per CIN2+ del saggio OncoPredict HPV SCR sui campioni di urina (ratio=0.95; 95%CI: 0.89-1.02) e di auto-prelievo-vaginale (ratio=0.95; 95%CI:0.89-1.01) non è differente rispetto ai prelievi cervicali. Anche la specificità per <CIN2 sulle urine è risultata simile a quella sui campioni cervicali (ratio=1.01; 95%CI: 0.94-1.08). Dopo ottimizzazione dei valori di cut-off del ciclo-soglia sui campioni vaginali, la specificità clinica del saggio sui campioni di auto-prelievo vaginale (ratio=0.95; 95%CI 0.89-1.006) è risultata paragonabile alla specificità sui campioni cervicali. Per tutti i campioni è stata dimostrata una concordanza analitica da moderata ad eccellente per la positività per HPV in generale e per i singoli genotipi HR tra il tipo di campione indice (urinario o vaginale) ed il comparatore (campione cervicale) per il saggio OncoPredict HPV SCR; sui campioni vaginali è stata riscontrata una concordanza migliore rispetto ai campioni di primo mitto di urina. Anche la sensibilità del test OncoPredict HPV QT per CIN2+ sui campioni di auto-prelievo urinario (ratio=0.97; 95%CI: 0.92-1.03) e vaginale (ratio=0.97; 95%CI:0.92-1.02) non è inferiore rispetto ai campioni cervicali. Dopo ottimizzazione del valore di cut-off per la positività del saggio per tutti i genotipi di HPV (> 15 copie virali per reazione), la specificità sui campioni urinari (ratio=0.94; 95%CI: 0.87-1.006) e vaginali (ratio=0.95; 95%CI: 0.89-1.02) è risultata paragonabile alla specificità dello stesso test sui campioni cervicali. Per la positività per specifico genotipo, il saggio OncoPredict HPV QT sui campioni vaginali ha una concordanza migliore con i campioni cervicali, rispetto ai campioni di primo mitto di urina. Il numero mediano di copie virali di HPV per reazione è risultato significativamente più alto nei campioni cervicali delle donne affette da CIN2+ e positive per il genotipo 16. Il saggio OncoPredict HPV SCR e QT presenta un’accuratezza diagnostica per l’identificazione delle lesioni CIN2+ non inferiore sui campioni di auto-prelievo vaginale e sulle urine del primo mitto rispetto ai campioni cervicali. Inoltre, l’utilizzo di questo saggio sui campioni di auto-prelievo permette di eseguire contemporaneamente lo screening ed il triage, mediante la genotipizzazione completa e la carica virale normalizzata.

The objective of the present study is to determine whether the OncoPredict HPV DNA®, a double-step reflex test comprising two sets of assays (Screening, SCR, and Quantitative Typing, QT), when performed on vaginal self-samples and first-void urine collected using FLOQSwab® and Colli-Pee®, respectively, is as accurate as clinician-taken cervical samples, following the VALHUDES protocol. The secondary objective is to assess the concordance of HPV genotyping among all samples and the normalized viral load of HR-HPV. A total of 600 women aged between 25 and 65 years were enrolled at 4 centers. The sensitivity of OncoPredict HPV SCR for CIN2+ in urine (ratio=0.95; 95% CI: 0.89-1.02) and vaginal samples (ratio=0.95; 95% CI: 0.89-1.01) was not significantly different from that in cervical samples. The specificity for <CIN2 in urine (ratio=1.01; 95% CI: 0.94-1.08) and vaginal samples (ratio=0.95; 95% CI: 0.89-1.006) was similar to that in cervical samples. Moderate to excellent concordance for HPV positivity in general and for individual HR genotypes was observed among all samples. The sensitivity of OncoPredict HPV QT for CIN2+ in urine (ratio=0.97; 95% CI: 0.92-1.03) and vaginal samples (ratio=0.97; 95% CI: 0.92-1.02) was not lower than that in cervical samples. After optimizing the cut-off value (>15 viral copies per reaction), the specificity in urine (ratio=0.94; 95% CI: 0.87-1.006) and vaginal samples (ratio=0.95; 95% CI: 0.89-1.02) was comparable to that in cervical samples. The OncoPredict HPV QT assay on vaginal specimens exhibited better concordance with cervical samples than first-void urines. The median number of HPV viral copies per reaction was significantly higher in cervical samples from HPV16 positive women diagnosed with CIN2+. The OncoPredict HPV SCR and QT assay demonstrated excellent diagnostic accuracy on self-collected samples. Additionally, this assay enables simultaneous screening and triage through full genotyping and assessment of normalized viral load