Strategie di riattivazione dell’attività di p53 in cellule tumorali mediante l’utilizzo di peptidi che interagiscono con Parc

L'insorgenza tumorale è guidata da inattivazione di geni soppressori o da attivazione di oncogeni che possono essere di tipo genetico o epigenetico. Il neuroblastoma è un tumore pediatrico che si origina dalle cellule della cresta neurale embrionale. In molti neuroblastomi primari e linee cellulari di neuroblastoma, p53 non risulta mutato, ma è frequentemente delocalizzato nel citoplasma. Anche nella linea cellulare di osteosarcoma U2OS p53 è wild type e risiede nel citoplasma. Recentemente, è stata identificata la proteina Parc, descritta come proteina citoplasmatica che lega p53, e che almeno in alcuni contesti cellulari, ostacola l'entrata di p53 nel nucleo. Poichè l'assetto wt di p53 non ne impedisce la riattivazione delle funzioni proapototiche, l'obbiettivo di questo studio è stato quello di idenificare strategie capaci di ripristinare l'attività di p53 in cellule tumorali, e di valutarrne il possibile uso terapeutico. In questo studio abbiamo testato l'attività di un peptide, relativo alla porzione C-terminale di p53 in grado di legare Parc, in cellule tumorali con p53 wt e citoplasmatica. L'ingresso del peptide nelle cellule era reso possibile fondendo quest'ultimo al dominio di trasduzione TAT (TAT-p53-C-ter). Dopo aver dimostrato la capacità del peptide di permeare nelle cellule, abbiamo utilizzato tale peptide per valutarne la capacità di riattivare p53 mediante la distruzione del legame Parc-p53. Utilizzando un saggio del doppio ibrido, abbiamo dimostrato che il dominio di tetramerizzazione di p53 (TD) è necessario e sufficiente a legare Parc. Inoltre il peptide TAT-p53-C-ter è in grado di distruggere il complesso Parc-p53. Saggi funzionali dimostrano che TAT-p53-C-ter stimola la trascrizione di geni reporter posti sotto il controllo di un promotore responsivo a p53. Inoltre il trattamento con TAT-p53-C-ter di linee cellulari di neuroblastoma provoca l'aumento dei livelli di espressione di p21, Bax ed MDM2, soltanto in cellule che possiedono p53 wt. Infine il peptide TAT-p53-C-ter stimolala rilocalizzazione nucleare di p53 e potenzia l'apoptosi indotta da etoposide. I dati prodotti in questo lavoro suggeriscono che peptidi in grado di interagire con Parc sono promettenti candidati per indurre aumento di apoptosi p53-dipendente in tumori che presentano p53 delocalizzata nel citoplasma, ma con assetto wt.