Identificazione di linee guida per l'analisi genetico-forense mediante utilizzo di DNA degradati in vitro.

Nel corso di questo lavoro e stato ottimizzato un metodo per ottenere †"mediante idrolisi acquosa- campioni di DNA danneggiati in maniera controllata (r2= 0.997). Uno di questi campioni, denominato trial sample (TS), veniva sottoposto ad un esperimento interlaboratorio (n=25) nel corso del quale ogni partecipante doveva fornire dati relativi alla quantificazione del campione ed al suo l'assetto genotipico. L'impiego della qPCR ha dimostrato che, in campioni danneggiati, e possibile fornire solo una indicazione che e relativa (ed inversamente proporzionale) alla lunghezza (r2=0.891) della regione target. Circa i genotipi forniti, veniva osservato che, a causa di un'elevata frequenza di artefatti di PCR, l'esecuzione di un basso numero di tre repliche(? 3)puo portare ad errori(n=4. Lo sviluppo del metodo †œconsensus TSPV", invece,eliminava tali errori di genotipizzazione. L'utilizzo di tale metodo di †œconsensus†� ha dimostrato che, per campioni degradati ed in condizione di Low Copy Number (? 96 pg/PCR), neanche l'esecuzione di sette repliche mette totalmente al riparo da errori di genotipizzazioni.Anche la tecnologia Illumina di Next Generation Sequencing e stata testata mediante un set di campioni danneggiati. Pure la fedelta? di questa tecnologia e stata molto influenzata dalla qualita? del templato. Il†œconsensus TSPV†�, inoltre, evidenziava che errori di genotipizzazione possono emergere quando vengono eseguite due sole repliche. Il maggiore limite dell'analisi forense sembra derivare proprio dall'elevatissima sensibilita? analitica oggi ottenibile.