Valutazione in silico e in vitro di potenziali inibitori dell'interazione YAP-TEAD

L'interazione YAP-TEAD ਠstata recentemente annoverata tra gli argomenti di recente interesse farmaceutico per la scoperta di piccole molecole sia ad azione terapeutica nel trattamento di forme tumorali solide sia come strumenti per la medicina rigenerativa. Nonostante i progressi degli ultimi anni, i tentativi di bersagliare l'interfaccia di TEAD comunicante con l'â"¦-loop di YAP sono stati ostacolati dalla complessità  di questa interazione proteina-proteina e dalla mancanza di potenti inibitori sintetici. A partire dalla libreria ChemDiv, comprendente composti con proprietà  specificatamente ritenute in grado di disturbare le interazioni proteina-proteina, un virtual screening comprendente metodi di progettazione structure-based e ligand-based ha condotto all'ottenimento di 50 potenziali candidati per la cavità  di hTEAD1 ospitante l'â"¦-loop di YAP. Con l'obiettivo di valutare il potenziale anti-proliferativo, questi nuovi hit sono stati testati sulla linea di carcinoma del colon-retto HT29 e sulla linea di tumore ovarico A2780. I sei migliori composti hanno conseguito IC50 nell'ordine dell'alto-micromolare in saggi di cell viability e sono stati testati ulteriormente sulla linea di tumore al colon HCT116, oltre ad essere ritenuti idonei per ulteriori studi in silico. Con lo scopo di ottenere altre molecole potenzialmente attive, la libreria ChemDiv precedentemente preparata e filtrata ਠstata sottoposta per una seconda volta a virtual screening per ottenere molecole simili e potenzialmente attive attraverso studi di similarità  e di docking. Inoltre, al fine di valutare la stabilità  del complesso di hTEAD1 con i sei hit compounds, simulazioni di dinamica molecolare sono state eseguite. Prove di sovra-espressione del costrutto ricombinante GST-hTEAD4 in ospite batterico sono state svolte con l'obiettivo di identificare condizioni ottimali per l'isolamento della proteina target per procedere con saggi biochimici. Con queste aspettative, un saggio di spiazzamento basato sulla spettroscopia di fluorescenza ਠstato messo a punto per testare l'affinità  dei candidati selezionati per questo sito. Come risultato preliminare, le anisotropie in emissione e in eccitazione del composto identificato sono aumentate a seguito dell'interazione con albumina sierica umana. Questo ritrovamento ਠritenuto idoneo allo sviluppo di un saggio nel quale lo spiazzamento di questo ligando dalla cavità  di TEAD ਠrilevabile dal decremento dei livelli di anisotropia.