Proteomic and immunofluorescence studies of ectopic F0F1 ATP synthase: a novel pharmacological target of HDL endocytosis in liver

Astratto Negli ultimi anni, diversi studi hanno descritto la presenza di subunità F0F1 ATP sintasi ed è inibitore IF1 sulla superficie cellulare di cellule diverse con il settore catalitico F1 rivolta verso l'esterno. L'enzima, chiamato ectopica ATPasi / sintasi, è stato trovato per mediare varie funzioni biologiche quali endocitosi HDL, regolazione pH transmembrana, riconoscimento della cellula tumorale. Una domanda interessante è se l'enzima ectopica ha la stessa composizione subunità e massa molecolare come quello della sintasi mitocondriale ATP. Un'altra questione è la sua localizzazione in membrana plasmatica, soprattutto in epatociti causa della loro natura polare, in cui l'enzima HDL media endocitosi. Utilizzando diversi metodi per preparare membrane plasmatiche di fegato di ratto, che sono stati sottoposti ad estrazione digitonina, hr CNE, immunoblotting, immunoprecipitazione e spettrometria di massa, la presenza di ectopici F0F1 complessi con un peso molecolare simile alla forma monomerica dei complessi mitocondriali è stato dimostrato. Inoltre, questi complessi contenevano entrambe le subunità nucleari e mitocondrialmente-codificato, rendendo improbabile che l'enzima è montato sulle membrane plasmatiche, mentre suggerendo che per essere trasportato dopo essere stato assemblato in mitocondri percorsi ancora sconosciuti. Inoltre, la preparazione della membrana plasmatica arricchita in proteine basolaterali conteneva quantità più elevate di completi e attiva F0F1 complessi, suggerendo loro localizzazione sul palo cellulare, che è coerente con la specifica funzione di modulare l'assorbimento HDL sulla superficie degli epatociti. Studi di immunofluorescenza ha permesso di dimostrare che i F0F1 ectoparassiti complessi sono stati localizzati in lipid rafts di membrana plasmatica sulle cellule HeLa. Solo in cellule non permeabilizzate IF1 co-localizzato con il F0F1 ATP sintasi β-subunità e flotillina, un marker zattera lipidica. Secondo, la subunità OSCP (sensibilità oligomicina conferisce proteina) è stato trovato anche l'associazione con il β-subunità e IF1, suggerendo la presenza di un funzionale, anche se piccolo mitocondri simile organizzazione sulla superficie cellulare di cellule HeLa. In particolare, il carico di colesterolo nelle cellule HeLa, eseguita a intervalli di tempo differenti, ridotto il contenuto mitocondriale di IF1, con un parallelo aumento della sua espressione ectopica. L'espressione più alta di superficie IF1 potrebbe quindi rappresentare un meccanismo per mantenere il livello di ATP nello spazio extracellulare risparmiando questo dalla idrolisi mediata F0F1 ATPasi. In conclusione, i nostri studi sia a livello cellulare e tissutale dimostrare l'esistenza di completo e funzionale ectopica F0F1 ATP sintasi visualizzando un peso molecolare simile a quella del complesso mitocondriale.