Effetto antitumorale di composti terapeutici naturali che inibiscono le vie di segnalazione di Notch ed Hedgehog in modelli sperimentali di Colangiocarcinoma Intraepatico umano

Il colangiocarcinoma intraepatico (iCCA) è un tumore delle vie biliari, di natura aggressiva e con prognosi sfavorevole, con un tasso di sopravvivenza a 5 anni <20%. L'incidenza e la mortalità dell'iCCA sono aumentate a livello globale, a causa di diagnosi tardive, risposte subottimali alla chemioterapia e una scarsità di opzioni di trattamento mirate. Una sfida critica nella gestione dell'iCCA è la sua elevata eterogeneità inter- e intra-tumorale, che complica la scoperta di biomarcatori e lo sviluppo di strategie terapeutiche efficaci, con un impatto sui risultati dei pazienti. L'Organizzazione mondiale della sanità (ICD-O-3.2) ha approvato la differenziazione dell'iCCA in small e large bile duct iCCA in base alle sue caratteristiche molecolari, istologiche e cliniche. Tuttavia, la correlazione tra caratteristiche molecolari e sottotipi specifici di iCCA rimane inesplorata, rappresentando una lacuna significativa nella ricerca traslazionale. I pathway di Notch e Hedgehog (Hh) svolgono un ruolo fondamentale nell'insorgenza e nell'avanzamento dell'iCCA, influenzando la crescita del tumore, la vitalità, l'attivazione delle cellule staminali cancerose e la riprogrammazione della transizione epitelio-mesenchimale. Questo progetto di ricerca mira a valutare gli effetti di nuovi composti naturali noti come Calcone (Chalc) e Glabrescione B (GlaB) che inibiscono, rispettivamente, i recettori Notch e Gli1, in vitro, in linee cellulari primarie e commerciali. La risposta del Chalc e del GlaB è stata valutata tramite il test di esclusione del Trypan Blue. È stato condotto un saggio MTS per accertare il valore IC50. È stato utilizzato il Western blot per analizzare i livelli delle proteine target. È stato utilizzato il wound-healing assay per valutare la capacità delle cellule di migrare. È stato condotto un colony formation assay per valutare la capacità delle cellule cancerose di formare colonie. È stata eseguita un'analisi citofluorimetrica per esaminare l'induzione della morte cellulare. I risultati sono stati convalidati in un minimo di tre esperimenti indipendenti e i dati quantitativi sono stati presentati come media ± SEM. I test t di Student sono stati utilizzati per valutare le varianze tra due gruppi in campioni appaiati. Un valore p inferiore a 0,05 è stato considerato statisticamente significativo (*p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001). I nostri risultati mostrano che il trattamento delle cellule iCCA con Chalc, GlaB libero o HA-GlaB determina una significativa diminuzione della proliferazione cellulare, vitalità, migrazione, capacità di formazione di colonie ,in modo dose- e tempo-dipendente (0,05<0,001). Il decremento dei livelli di proteina Gli1 è evidente dopo i trattamenti con GlaB libero e HA-GlaB. Inoltre, il GlaB è in grado di indurre la morte (apoptosi e necrosi) delle cellule di iCCA dopo la somministrazione, rispetto ai controlli. Il trattamento delle stesse linee cellulari con il Chalc ha avuto un impatto meno significativo. Infatti, il Glabrescione B, ha la capacità di ostacolare la crescita, la sopravvivenza, l'invasività delle cellule di iCCA e indurne la morte. Nel complesso, queste informazioni offrono la comprensione di un nuovo e potenzialmente vantaggioso composto chimico naturale per il trattamento dell'iCCA in vivo.